Methoden zur Gewebekultur bei Tieren
Es gibt folgende Möglichkeiten, tierische Zellen zu züchten :
Primäre Zellkultur
Diese Zellen werden auf zwei Arten direkt aus Geweben und Organen entnommen: durch mechanische oder chemische Desintegration, auch durch enzymatischen Aufschluss ist es möglich. Diese Zellen werden in geeigneten Glas- oder Kunststoffbehältern zum Wachstum angeregt, und es wird ein geeignetes Medium für die Stimulation bereitgestellt ihr Wachstum. Wissenschaftler bevorzugen diese Methode, weil sie repräsentativer für die Zelltypen im Gewebe ist, aus dem sie entnommen wurde, obwohl die Wachstumsrate niedrig und heterogen ist.
Sekundäre Zellkultur
Den primären Zellkulturen wird eine Probe entnommen und in einem anderen Medium kultiviert, da diese über einen längeren Zeitraum wachsen, sodass sich aus den Primärkulturen Sekundärkulturen bilden, die im Gegensatz zu den Zellen primärer Zellkulturen über einen längeren Zeitraum verbleiben auf die kontinuierliche Zufuhr von Nährstoffen in regelmäßigen Abständen.
Die Übertragung der Zellen auf Sekundärkulturen erfolgt durch enzymatischen Zellverdau, gefolgt vom Waschen und Resuspendieren der erforderlichen Zellmenge in geeigneten Volumina. Einige Wissenschaftler bevorzugen Sekundärzellkulturen, weil sie einfach zu züchten und leicht verfügbar sind. Sie werden häufig in der Virologie eingesetzt und immunologische Forschung.
Zellwachstumslinien
Abhängig vom Alter der transplantierten Zelle werden die Zelltypen wie folgt in zwei Typen unterteilt:
- Begrenzte Zelllinien
Die Linien dieser Zellen werden als begrenzt bezeichnet, weil sie eine begrenzte Anzahl von Zellen enthalten und die Zellen in begrenzten Linien wachsen, wobei die Zellen langsam wachsen und 24 bis 96 Stunden dauern. Diese Zellen zeichnen sich dadurch aus, dass das Wachstum der Zellen in ihnen ist nicht intensiv.
- Nicht ausgewählte Zelllinien
Sie werden aus in vitro transformierten Zelllinien oder Krebszellen gewonnen und sind unspezifische Linien, da sie in Monoschicht- oder Suspensionsform kultiviert werden können, da sich diese Zellen schnell teilen, was 12 bis 14 Stunden dauert, und diese Zellen unbegrenzt kultiviert werden können Linien können eine Störung der Chromosomenform oder eine Veränderung der Chromosomenzahl anzeigen.
Heutzutage wurden mit den Fortschritten in der Technologie tierischer Zellkulturen eine Reihe von Zelllinien entwickelt, die zur Herstellung von Impfstoffen, therapeutischen Proteinen, pharmazeutischen Produkten und Antikrebsmaterialien verwendet werden. Es ist vorzuziehen, Zelllinien zu verwenden, die dazu in der Lage sind wachsen durch Suspension, weil sie eine schnellere Wachstumsrate haben. Der Eierstock des Chinesischen Hamsters ist die am häufigsten verwendete Zelllinie bei Säugetieren.
Wachstumsanforderungen
Das für die Zellkultur verwendete Medium ist sehr komplex und variiert stark je nach Art der verwendeten Zellen. Es enthält im Allgemeinen Aminosäuren, Vitamine und Salze zur Aufrechterhaltung des osmotischen Drucks und Glukose sowie ein Puffersystem für Bicarbonate zur Aufrechterhaltung eines pH-Werts zwischen 7,2 und 7.4. Es enthält außerdem Hormone, Sauerstoff und Kohlendioxid. Zur Verbesserung der Zellwachstumsrate.
Es ist notwendig, eine kleine Menge Blutserum hinzuzufügen und viele Antibiotika wie Penicillin und Streptomycin hinzuzufügen, um eine bakterielle Kontamination zu verhindern, und die verwendete Temperatur variiert je nach Zelltyp. Bei Säugetieren wachsen Zellen bei 37 Grad Celsius, während Zellen entnommen werden von Kaltblütern wachsen bei einer Temperatur von 15 bis 26 Grad Celsius.