روش های کشت بافت حیوانی

روش های کشت بافت حیوانی

روش های زیر برای کشت سلول های حیوانی است :

 

کشت سلولی اولیه

این سلول ها به دو صورت جداسازی مکانیکی یا شیمیایی مستقیماً از بافت ها و اندام ها گرفته می شوند و همچنین با هضم آنزیمی امکان پذیر است و این سلول ها در ظروف شیشه ای یا پلاستیکی مناسب برای رشد تحریک می شوند و محیط مناسبی برای تحریک آنها قرار می دهند. دانشمندان این روش را ترجیح می دهند زیرا بیشتر نماینده انواع سلولی در بافت هایی است که از آنها گرفته شده اند، اگرچه سرعت رشد پایین و ناهمگن است.

 

کشت سلولی ثانویه

نمونه ای از کشت های سلولی اولیه گرفته می شود و در محیط دیگری کشت می شوند و برای مدت طولانی رشد می کنند. کشت های ثانویه از کشت های اولیه تشکیل می شوند که بر خلاف سلول های کشت های اولیه سلولی برای مدت طولانی باقی می مانند. به تغذیه مداوم مواد مغذی در فواصل منظم.

سلول‌ها با هضم آنزیمی سلول‌ها به کشت‌های ثانویه منتقل می‌شوند و به دنبال آن شستشو و تعلیق مجدد مقدار لازم سلول در اندازه‌های مناسب انجام می‌شود.بعضی از دانشمندان کشت‌های سلولی ثانویه را ترجیح می‌دهند زیرا رشد آنها آسان است و به راحتی در دسترس هستند. آنها به طور گسترده در ویروس‌ها استفاده می‌شوند. و تحقیقات ایمونولوژیک

 

خطوط رشد سلولی

انواع سلول ها بسته به سن سلول پیوندی به دو نوع تقسیم می شوند که به شرح زیر است:

• خطوط سلولی محدود

این رده های سلولی محدود نامیده می شوند زیرا حاوی تعداد محدودی سلول هستند و سلول ها در خطوط محدود رشد می کنند سلول ها به کندی رشد می کنند و از 24 تا 96 ساعت طول می کشد. مشخصه این سلول ها این است که رشد سلولی آنها متراکم نیست.

• خطوط سلولی انتخاب نشده

آنها از رده های سلولی تبدیل شده در شرایط آزمایشگاهی یا سلول های سرطانی به دست می آیند.این خطوط غیر اختصاصی هستند و می توان آنها را به صورت تک لایه یا سوسپانسیون کشت داد.این سلول ها به سرعت تقسیم می شوند و 12 تا 14 ساعت طول می کشد و می توان آنها را به طور نامحدود کشت داد. ممکن است ناهنجاری هایی را نشان دهد شکل کروموزوم یا تغییر در تعداد کروموزوم ها.

امروزه با پیشرفت تکنولوژی کشت سلول های حیوانی، تعدادی رده سلولی ایجاد شده و برای تولید واکسن، پروتئین های درمانی، محصولات دارویی و مواد ضد سرطانی استفاده می شود و ترجیحاً از رده های سلولی که قادر به رشد هستند استفاده شود. تخمدان همستر چینی پرمصرف ترین رده سلولی در پستانداران است.

 

الزامات رشد

محیط مورد استفاده برای کشت سلولی بسیار پیچیده است و بسته به نوع سلول های مورد استفاده بسیار متفاوت است و به طور کلی شامل اسیدهای آمینه، ویتامین ها و نمک ها برای حفظ فشار اسمزی، گلوکز و یک سیستم بافر بی کربنات برای حفظ pH بین 7.2 و 7.4 است. همچنین حاوی هورمون ها، اکسیژن و دی اکسید کربن است.برای بهبود سرعت رشد سلولی.

برای جلوگیری از آلودگی باکتریایی باید مقدار کمی سرم خون اضافه کرد و چندین آنتی بیوتیک مانند پنی سیلین و استرپتومایسین اضافه کرد.دمای استفاده شده بسته به نوع سلول ها متفاوت است سلول های پستانداران در دمای 37 درجه سانتیگراد رشد می کنند در حالی که سلول های گرفته شده از سرما. -حیوانات خونی در دمای 15 تا 26 درجه سانتیگراد رشد می کنند.